安格斯犊牛腹泻的病理观察、病原分离鉴定和药敏试验及防治措施
林清1，2，王永*1，2，王晶钰1，2，昝林森1，2，王继儒3，罗顺平3，王菁3，马国锋3，蔡永红3
(1.西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌;2.宁夏西海固高端牛产业研究院，宁夏海原;3.海原华润农业有限公司，宁夏海原)
摘要:［方法］宁夏某牛场的安格斯犊牛发生了较为严重的腹泻症状，死亡率高达28%。经过对死亡病牛剖检，6头进行病理观察，采样病变心脏、肺、肝组织及肠系膜淋巴结，送至西北农林科技大学动物医学院疫病检测实验室进行分离、鉴定及药敏试验。［结果］结果表明，此次安格斯犊牛腹泻病症特殊，除腹泻症状外，在用药治疗后腹泻症状减轻，但随后出现神经症状，主要为运动障碍和神志不清，之后死亡;实验室检测的致病菌为志贺氏杆菌引起的腹泻;经药敏试验发现不同组织的敏感药物有所差异，但大观霉素具有广泛杀灭该菌的效果。［结论］依据以上试验结果并结合志贺氏杆菌的代谢和致病特征制定出预防和治疗该病的具体方案，为实际生产提供指导性意见。
关键词:安格斯犊牛腹泻;病理观察;病原分离鉴定;志贺氏杆菌;大观霉素
中图分类号:S．23文献标识码:A文章编号:-()01--03
年10-11月份，宁夏自治区中卫市某牛场的安格斯犊牛发生了较为严重的腹泻症状。死亡率高达28%。犊牛腹泻是新生犊牛发生的一种急性腹泻病，引起犊牛腹泻的病因很多，包括细菌、病*、寄生虫等病原微生物以及营养因素和环境因素等［1］。犊牛出生3周左右最容易发病［2］，但本次犊牛腹泻在产后3d就出现相应症状。为有效应对犊牛腹泻，需进行实验室诊断，病原学诊断，提升准确性，降低犊牛死亡率［3］。为快速查明本次安格斯犊牛腹泻的原因，本文分别对发病死亡牛及时采样送检，进行病原分离、鉴定、药敏试验，并提出实际预防和治疗措施，以指导实际生产。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1病牛
病牛来源于宁夏自治区中卫市某牛场，发病死亡牛6头，分别采集死亡1h后的犊牛病变心脏、肺、肝及肠系膜淋巴结组织样，冰袋保存。
1.1.2生化试剂
肉汤培养基、琼脂培养基参照文献［4］配制，4℃冰箱保存备用。革兰氏染色液来自实验室。
1.1.3主要仪器
超净工作台()，上海鸿都电子科技有限公司;自动恒温震荡培养箱(ZH－WY－C)，上海智诚分析仪器制造有限公司;隔水式恒温培养箱(GH－BC)，北京永光明医疗器厂;4℃冰箱(BCD－S/D)，海信容声冰箱有限公司;立式电热压力蒸汽灭菌锅(XFH－30CA)，浙江新丰医疗器械有限公司;台式高速离心机(H3－18KＲ)，湖南可成仪器设备有限公司;显微镜及实验室常用大小试管及培养皿等。1．1．4药敏试验大观霉素(10μg/片)，庆大霉素(10μg/片)，青霉素(10μg/片)，头孢曲松(10μg/片)，氨苄西林(10μg/片)，以上药敏纸片来自杭州天和微生物实际有限公司。
1.2方法
1.2.1病理观察
对发病犊牛症状、发病时间、发病特点、治疗效果进行诊断、处理和观察;对死亡犊牛在1h内剖检，观察病变部位特征，并采集组织样。
1.2.2组织样处理
取组织样mg研磨5min，加生理盐水10mL，离心10min，取上清液涂片。
1.2.3染色镜检
涂片革兰氏染色，镜检观察细菌染色及形态特征。
1.2.4分离培养
将处理的组织样取上清液μL摇匀，接种于肉汤培养基中，37℃恒温振荡培养18～24h后镜检，并将培养的细菌在琼脂培养基上划线培养，然后再继续37℃培养18～24h，随后选择单个典型菌落染色镜检。
1.2.5生化鉴定
参照文献［5］方法进行。
1.2.6药敏试验
参照文献［6-8］方法进行，采用K－B纸片扩散法。综合上述信息之后提出预防和治疗措施。
2结果与分析
2.1病理观察结果与分析
病例1:安格斯母犊HJ出生于年10月18日，妊娠天数d，体重29kg。该犊牛于年10月28日开始出现拉稀症状，肌注加口服治疗后，于年11月1日出现食欲不振，脱水症状，体温36.8℃。静注头孢后，于年11月2日晚，治疗无效死亡。解剖发现:心脏基底部有明显的炎症斑点。死亡原因:心肌炎。具体结果以实验室检测结果为准。
病例2:安格斯母犊HJ出生于年10月19日，妊娠天数d，体重27kg。该犊牛于年10月27日开始出现腹泻症状，肌注加口服治疗后，年10月31日出现精神不振，不食症状，体温:35.8℃。静注头孢治疗后于年11月3日无效死亡。解剖发现:肠系膜发炎，肠管发炎，心脏基底部有果冻样病变，肺脏苍白。死亡原因:肠炎继发心肌炎死亡。
以上发病均在产后10d左右，与一般报道在3周内发病情况类似，但有提早发病的趋势。详情见图1~3。
2.2病原分离培养及药敏试验结果与分析
实验室对不同组织的样品进行了处理，通过病原菌分离、培养、鉴定等过程，得出病原菌为志贺氏杆菌导致的犊牛腹泻病的结论，详见图4～6(未注明的是肺组织培养群落)。药敏试验结果如表1。
表1犊牛腹泻病原的药敏试验
注：“S”代表敏感；“I”代表中介；“R”代表耐药。
资料显示:志贺氏杆菌大小为(0.5～0.7)μm×(2～3)μm，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌，直杆菌，形态似其他肠杆菌科的种。革兰氏阴性，不运动，兼性厌氧，具有呼吸和发酵两种类型的代谢。接触酶阳性(只有1个种例外)，氧化酶阴性，有机化能营养型，发酵糖类不产气(除了少数种产气外)，不利用柠檬酸盐或丙二酸盐作为惟一碳源，KCN中不生长，不产H2S。是动物的肠道致病菌，引起细菌性痢疾。以上特征与鉴定结果有较高切合度。
那么，志贺氏菌的致病机理有:菌毛能粘附于回肠末端和结肠粘膜的上皮细胞表面，继而在侵袭蛋白作用下穿入上皮细胞内，一般在粘膜固有层繁殖形成感染灶。此外，凡具有K抗原的痢疾杆菌，一般致病力较强;各型痢疾杆菌都具有强烈的内*素，内*素作用于肠壁，使其通透性增高，促进内*素吸收，引起发热，神志障碍，甚至中*性休克等。内*素能破坏粘膜，形成炎症、溃汤，出现典型的脓血粘液便。内*素还作用于肠壁植物神经系统，至肠功能紊乱、肠蠕动失调和痉挛，尤其直肠括约肌痉挛最为明显，出现腹痛、里急后重(频繁便意)等症状;志贺氏菌A群Ⅰ型及部分2型菌株还可产生外*素，称志贺氏*素，为蛋白质，不耐热，75～80℃环境下1h被破坏。该*素具有3种生物活性:①神经*性，将*素注射家兔或小鼠，作用于中枢神经系统，引起四肢麻痹、死亡;②细胞*性，对肾细胞和HeLa细胞均有*性;③肠*性，具有类似大肠杆菌、霍乱弧菌肠*素的活性，可以解释疾病早期出现的水样腹泻。以上情况与剖检结果基本一致。
2.3紧急预防和治疗措施
年7—10月，针对犊牛发生流行性腹泻，虽全力救治，仍然发生多头犊牛死亡或淘汰，造成巨大的经济损失。目前犊牛腹泻发病死亡率高，预防和治疗效果不明显。经西北农林科技大学预防兽医学实验室对6头犊牛病料病原微生物分离检测和药敏实验，表明主要病原为志贺氏菌(痢疾杆菌)，筛选出3种敏感抗菌素用于防治，有一定效果。为此，详细分析了病情，在综合实验室试验结论的基础上提出当前及后续解决问题的措施。
2.3.1临产牛
产前3d肌肉注射敏感抗生素大观霉素。建议剂量40mg/kg体重，每天2次。
2.3.2产房
产房严格消*，垫草厚度不小于20cm，接生地面铺设塑料布，严格杜绝犊牛出生后嘴与脏污物接触，犊牛初乳喂量不低于2.5kg。
2.3.3犊牛
出生后3～5d肌肉注射大观霉素。建议预防剂量20mg/kg体重，每天1次;治疗剂量40mg/kg体重，每天2次。对于发生腹泻犊牛，治疗原则保证不脱水，不酸中*;胃管投服口服补液盐，并保证能量(葡萄糖注射)。病情严重犊牛宜禁喂牛奶24h。
2.3.4犊牛饲喂方式
改变目前“母带犊”的犊牛饲喂方式。学习奶牛公司犊牛培育模式，收集初乳，经巴氏消*后集中饲喂犊牛。必要时可以购买商品初乳，做好肉牛母牛挤奶保定架和挤奶、喂奶设备。
参考文献：略。
英文摘要：略。
引用本文：
林清，王永*，王晶钰，等.安格斯犊牛腹泻的病理观察、病原分离鉴定和药敏试验及防治措施[J].中国牛业科学,,47(1):23-25.
图片：来源于网络
网络编辑：*永震
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